Истифода ва чораҳои эҳтиётии найчаи сентрифугаи ултрафилтратсия
1) Як найчаи мувофиқи ултрафилтрро интихоб кунед.Дар хотир доред, ки мембранаҳои UF дар сатҳи таҳаммулпазирии худ ба моддаҳои гуногуни кимиёвӣ фарқ мекунанд.Одатан, қубурҳои ултрафилтратсияро бо буридани вазни молекулавии 10 кДа метавон бо буридани вазни молекулавӣ интихоб кард, ки набояд аз 1/3 вазни молекулавии сафедаи мавриди таваҷҷӯҳ, ба мисли 35 кДа зиёд бошад.Агар вазни молекулавии сафедаи мавриди таваҷҷуҳ тақрибан 10 кд бошад, найчаи ултрафилтратсияро бо буридани вазни молекулавии 3 КД истифода бурдан мумкин аст.
(2) Ультрафильтратсия, ки нав харида шудааст, хушк аст, бо оби ултра тоза пеш аз истифода илова карда мешавад ва об пурра аз мембрана, ваннаи ях ё яхдон гузашта, барои чанд дақиқа пешакӣ хунук карда мешавад.Пас аз он обро, яъне моеъи протеинро мерезанд ва чӣ қадар меандозанд, ки кадоме аз хати сафеди болои найча зиёд набошад.Амалиёт сабук аст ва пеш аз илова кардани маҳлули сафеда найчаи ултрафилтрро дар ях пешакӣ хунук кардан лозим аст.
3) Ҳам масса ва ҳам маркази вазнинӣ бояд ба мувозина расиданд.Дар хотир доред, ки суръати гардиш ва суръатбахшӣ чандон зуд нестанд, вагарна мембранаи ултрафилтратсия мустақиман осеб мерасонад.Ультрафильтратсияи центрифугаӣ оғоз шуд (центрифуга то 4 дараҷа сард карда мешавад).Пас аз он ки RPM-и центрифугаҳои гуногун ба g табдил дода шуд, он дигар буд.Шитоби центрифуга ба минимум танзим карда, фишори мембранаро кам кард.Дар хотир доред, ҳатман пас аз расидан ба суръати таъиноти центрифуга центрифугаро тарк кунед, ё агар шумо мушкилот дошта бошед, бори аввал наметавонад онро ҳал кунед.Самти мембрана ба шпиндель мувофиқи дастурҳо танзим карда шуд (қуттии центрифугаи кунҷӣ мембрана ба меҳвар перпендикуляр аст).Дар истифодаи амалӣ суръати гардиши умумӣ назар ба он дар дастурҳо пасттар аст, то мӯҳлати истифодабарии найчаи центрифуга дароз карда шавад.
3) Ҳам масса ва ҳам маркази вазнинӣ бояд ба мувозина расиданд.Дар хотир доред, ки суръати гардиш ва суръатбахшӣ чандон зуд нестанд, вагарна мембранаи ултрафилтратсия мустақиман осеб мерасонад.Ультрафильтратсияи центрифугаӣ оғоз шуд (центрифуга то 4 дараҷа сард карда мешавад).Пас аз он ки RPM-и центрифугаҳои гуногун ба g табдил дода шуд, он дигар буд.Шитоби центрифуга ба минимум танзим карда, фишори мембранаро кам кард.Дар хотир доред, ҳатман пас аз расидан ба суръати таъиноти центрифуга центрифугаро тарк кунед, ё агар шумо мушкилот дошта бошед, бори аввал наметавонад онро ҳал кунед.Самти мембрана ба шпиндель мувофиқи дастурҳо танзим карда шуд (қуттии центрифугаи кунҷӣ мембрана ба меҳвар перпендикуляр аст).Дар истифодаи амалӣ суръати гардиши умумӣ назар ба он дар дастурҳо пасттар аст, то мӯҳлати истифодабарии найчаи центрифуга дароз карда шавад.
(4) Вақте ки ба 1 мл боқимонда консентратсия карда мешавад, 50ул маҳлули буфериро гиред, 10ул ҷараёнро илова кунед ва бубинед, ки оё ягон ранги кабуд вуҷуд дорад, ҳамчун доварӣ, ки оё дар найчаи ултрафилтратсия сафеда мавҷуд нест.Агар қубур рахна бошад, қабати болоро дубора рехт ва ба қубури нав гузаронед, то ултрафилтратсияро оғоз кунед.Барои дақиқ муайян кардани он, ки оё найчаҳо пазмон шуда буданд, 10 дақиқа бо 5 мгмл BSA пеш аз ҷараён, бо ширеши сафеда ё таҳлили хоми Брэдфорд центрифуга кунед ва бо илова кардани маҳлули консентратсияи сафедаи боқимонда (ки дар ях кор мекунад ва сафедаҳо гармиро пешгирӣ мекунад) идома диҳед. тамоми концентрат зам карда шудааст.Ҳангоми центрифугакунӣ эҳтиёт шавед, агар боришоти сафедаҳо ба амал ояд, ки боиси баста шудани най гардад.Агар боришот рух диҳад, муайян кунед, ки сабаби мушаххаси боришот консентратсияи аз ҳад зиёди сафеда аст ё буфери номуносиб;Аввалинро метавон тавассути ултрафилтратсияи якчанд найчаҳои ултрафилтратсияро ҳамзамон кам кардани консентрататсия ва дуюмиро бо роҳи мубодилаи маҳлулҳои буферии гуногун то боридшавии сафеда ҳал кардан мумкин аст.
(4) Вақте ки ба 1 мл боқимонда консентратсия карда мешавад, 50ул маҳлули буфериро гиред, 10ул ҷараёнро илова кунед ва бубинед, ки оё ягон ранги кабуд вуҷуд дорад, ҳамчун доварӣ, ки оё дар найчаи ултрафилтратсия сафеда мавҷуд нест.Агар қубур рахна бошад, қабати болоро дубора рехт ва ба қубури нав гузаронед, то ултрафилтратсияро оғоз кунед.Барои дақиқ муайян кардани он, ки оё найчаҳо пазмон шуда буданд, 10 дақиқа бо 5 мгмл BSA пеш аз ҷараён, бо ширеши сафеда ё таҳлили хоми Брэдфорд центрифуга кунед ва бо илова кардани маҳлули консентратсияи сафедаи боқимонда (ки дар ях кор мекунад ва сафедаҳо гармиро пешгирӣ мекунад) идома диҳед. тамоми концентрат зам карда шудааст.Ҳангоми центрифугакунӣ эҳтиёт шавед, агар боришоти сафедаҳо ба амал ояд, ки боиси баста шудани най гардад.Агар боришот рух диҳад, муайян кунед, ки сабаби мушаххаси боришот консентратсияи аз ҳад зиёди сафеда аст ё буфери номуносиб;Аввалинро метавон тавассути ултрафилтратсияи якчанд найчаҳои ултрафилтратсияро ҳамзамон кам кардани консентрататсия ва дуюмиро бо роҳи мубодилаи маҳлулҳои буферии гуногун то ба вуҷуд наомадани боришоти сафеда ҳал кард.
(5) Якчанд қадамҳои аввал барои консентратсияи сафеда истифода мешаванд ва агар буфер иваз карда шавад, бо нарм буфери нав илова кунед (ултрафилтр тавассути мембранаи ултрафилтратсия 0,22 мм) ба тақрибан 1 мл протеини умумӣ ва аз нав консентратсияи тақрибан 1 мл барои се се маротиба пай дар пай, бо ҳаҷми ниҳоии консентратсияи ниҳоӣ вобаста ба консентратсияи сафеда дилхоҳ, умуман на бештар аз 500ul, балки дар доираи 200ul.Дар се маротиба ба 1000 × ё бештар аз он ноил шавед, ки аслан ба қадри тағирёбии буфер, ки ҳар дафъа ҳадди аққал 10 × ё бештар ғанисозии ҳаҷм ҳисоб карда мешавад.
(5) Якчанд қадамҳои аввал барои консентратсияи сафеда истифода мешаванд ва агар буфер иваз карда шавад, бо нарм буфери нав илова кунед (ултрафилтр тавассути мембранаи ултрафилтратсия 0,22 мм) ба тақрибан 1 мл протеини умумӣ ва аз нав консентратсияи тақрибан 1 мл барои се се маротиба пай дар пай, бо ҳаҷми ниҳоии консентратсияи ниҳоӣ вобаста ба консентратсияи сафеда дилхоҳ, умуман на бештар аз 500ul, балки дар доираи 200ul.Дар се маротиба ба 1000 × ё бештар аз он ноил шавед, ки аслан ба қадри тағирёбии буфер, ки ҳар дафъа ҳадди аққал 10 × ё бештар ғанисозии ҳаҷм ҳисоб карда мешавад.
Вақти фиристодан: Ноябр-09-2022